目的
規(guī)范生化酶活及含量檢測中細胞樣本的采集、儲存等操作規(guī)范。
適用范圍
適用于生化酶活及含量檢測中細胞樣本的采集及儲存。
操作流程
（1）材料準備
材料 | 型號或級別 |
實驗服、手套、口罩等防護設施 | 醫(yī)用級 |
離心管、凍存管 | 建議使用無菌級管 |
移液器、槍頭 | 無菌 |
記號筆 | 務必使用油性記號筆 |
細胞鏟 | 無菌 |
液氮 | |
離心機 | 4℃ |
冰箱 | -80℃ |
（2）細胞樣本可分為貼壁細胞和懸浮細胞，兩種類型細胞樣本采集方法如下：
貼壁細胞：
取對數(shù)生長期細胞，去掉培養(yǎng)液，用適量預冷 PBS 清洗兩遍，再加入少量PBS，用細胞鏟刮下細胞，置于1.5 mL 離心管中，在1000 g，4℃離心 1 min，液氮淬滅。
懸浮細胞：
取對數(shù)生長期細胞液，在1000 g，4℃離心 1 min，去掉培養(yǎng)液，使用預冷PBS 清洗細胞兩遍，置于1.5 mL離心管中，在1000g離心1 min，液氮淬滅。
（3）收集 收集的細胞即可用于細胞內代謝酶活及物質分析，上清液可用于細胞外代謝酶活及物質分析。
（4）儲存 所有樣本均做好標記，儲存于液氮或-80℃冰箱中。
樣本量要求細胞樣本量≥107 /指標
儲存及運輸
樣本應儲存于液氮或-80℃冰箱中。運輸過程中應全程保持低溫，建議使用干冰冷凍運輸。
注意事項
（1）材料準備 凍存管、離心管、槍頭等材料必須保持無菌，避免污染。
（2）快速原則 請務必提前設計準備好實驗和材料，快速取樣和預處理。
（3）低溫原則 在采集、處理及運輸過程中，請全程保持低溫。
（4）一致性原則 在實驗設計和取樣的過程中，保持一致性。
a)設計一致性，不同樣品除了需研究的內容不一致，其它都保持一致；
b)時間一致性，采樣時間應控制在同一時間范圍內；
c)預處理一致性，即所有樣品的預處理方法、試劑等均保持一致。
（5）采集過程中需要對細胞進行計數(shù)，數(shù)量為≥10 7 /指標，務必保持樣本量的一致。
（6）操作過程中要保證細胞完整性，避免細胞內代謝物外漏。
（7）樣本編號一定要清楚、牢固，防止在冷凍過程中編號丟失。